【视频】一文搞定溶出方法学验证-德信远 根据笔者以往工作亲身经历，并参考谢沐风老师及众多网友的资料见解，对溶出度分析方法的研究过程进行注解，旨在抛砖引玉，让伙伴们在工作中能更加顺利，尤其在当前，面对海量质量一致性评价工作，大量项目如何可以科学管控当真是压力山大，不妨使用智能项目管理系统。 本文对溶出的基本理论不再赘述，直接叙述操作过程及注意事项，给同仁们提供一个溶出方法学研究的模板，供同仁参考。 1、前期调研及研究在建立溶出度检查方法前，需首先了解原料药的相关理化性质和制剂的相关参数，尤其

【视频】一文搞定溶出方法学验证-德信远

根据笔者以往工作亲身经历，并参考谢沐风老师及众多网友的资料见解，对溶出度分析方法的研究过程进行注解，旨在抛砖引玉，让伙伴们在工作中能更加顺利，尤其在当前，面对海量质量一致性评价工作，大量项目如何可以科学管控当真是压力山大，不妨使用智能项目管理系统。

本文对溶出的基本理论不再赘述，直接叙述操作过程及注意事项，给同仁们提供一个溶出方法学研究的模板，供同仁参考。
1、前期调研及研究
在建立溶出度检查方法前，需首先了解原料药的相关理化性质和制剂的相关参数，尤其是原料药pka、溶解性和制剂的吸收代谢参数尤为关键。
1.1 pKa值的查询与测定
pKa值十分重要，可通过查询或测定获得。
ACD/I-Lab，https://ilab.acdlabs.com/iLab2/index.php，pubchem，merck index，scifinder，reaxys，chemspider
也可以自行测定，具体有滴定法、光谱法、毛细管电泳法。
若该值未涵盖于四条溶出曲线pH值范围，则研发时第5-6条溶出曲线就应测定该pKa值所对映的pH值介质或以上“pH值-溶解度曲线”上急剧变化的pH值，这些pH值溶出曲线的测定对于仿制制剂研发和曲线比对均具有十分重要的意义徐二航。
1.2 pH值-溶解度曲线的测定
对于原料药，有两方面需要了解，一是药物在不同pH条件下的溶解度，或在不同介质中的溶解度，二是药物在溶液状态下的药物的稳定性。由于溶出度检查方法要求药物在选择的介质中可以满足漏槽条件的要求，因此，了解不同pH条件下的溶解度对介质的选择有重要意义。
pH值测定点个数需依据药物的离子化特性来决定，例如，当药物的pka为3—5时，药物的溶解度应至少在pH=1,pH=pka-1,pH=pka，pH=pka+1和pH=6.8处测定或直接采用等差数列含参考点法（仿制药标准所采用的pH即为参考点），pH测定点个数应可以满足准确绘制pH一溶解度曲线的需要。
或可事先进行不同粒径的微粉化处理，可同时筛选不同粒径分布范围，此项实验确切的说应该在进行制剂处方筛选研究初期时进行。
1.2.1操作方法：
取过量的原料药，置8支具塞锥形瓶中，分别加pH1.0、……、7.5水性介质50或100ml，置37±1℃水浴振荡过夜，形成过饱和溶液，取出后滤过，取续滤液立即经HPLC法测得溶解度，绘制pH值-溶解度曲线或带有粒度对比信息的pH值-溶解度曲线。
对于难溶性药物，对照品溶液可酌情采用纯甲醇或纯乙腈配制。
pH
粒径1
粒径2
37℃
20℃
37℃
20℃
溶解度
是否满足漏槽
溶解度
是否满足漏槽
溶解度
是否满足漏槽
溶解度
是否满足漏槽
1
2
pka-1
pka
pka+1
6
6.8
7.5
每个pH处溶解度数值至少重复测定三次，并根据实验结果的偏差情况适当增加测定次数。
漏槽条件的试验方法及判定详见2.2溶出介质确定。
该曲线的绘制可提供众多信息：如与X轴平行，说明各pH值溶解度几近一致，由此可预测多条溶出曲线应重合；如曲线上有陡峭变化、甚至是有数量级差异，则可揭示多条溶出曲线形状会有所差异（即高低错落），最低的那条曲线一定是溶解度最低的pH值介质，这为制剂研发方向提供了针对性的依据石文忠，同仁们千万不要小看这个试验。
如样品在各pH条件溶液内稳定，采用同样的方法在20-25℃水浴中振荡进行溶解度实验，目的是为了说明在进行溶出实验时，溶出液取样后在液相排序进样过程中，实验室夜间温度降低，导致溶液温度降低，可能导致溶解度减小引发析晶，使得溶出度数据偏低等异常现象，这种现象在冬季试验尤为需要注意（真正可以做到室温恒温恒湿的有几家，同仁们都懂的）。
1.3原料药在各介质中稳定性考察
某些原料药在某些特定的pH条件会发生降解，使得在进行溶解度测定时，溶解度数据出现偏低等现象，这些不稳定的条件如果可以明确，将在制剂处方开发时避免一些问题的出现，少走弯路，为了减少实验操作，并获得更多的实验数据，原料药在介质中的稳定性考察，可采取与溶解度实验同步进行的方式，当有多个粒径作对比测定时，仅需采用最小粒径的进行测定即可，减少工作量，又可以说明问题，具体做法如下：
在各溶解度实验溶液振荡30min时，精密量取各溶液10ml，滤过，精密量取续滤液5ml，各置于10ml量瓶内，以有关物质检测分析方法所用初始流动相稀释至刻度（同法配制溶剂空白），立即置于冰柜冷冻，依次取出溶液采用有关物质的分析方法进行检测，作为各介质的0时数据，在溶解度实验完成振荡溶解后，再精密量取各溶液10ml，滤过，精密量取续滤液5ml，各置于10ml量瓶内，以有关物质检测分析方法所用初始流动相稀释至刻度，采用有关物质的分析方法进行检测，作为各介质振荡溶解终点时刻的数据，按照面积归一化法对有关物质的分析结果进行对比分析，得出溶液稳定性测试结果。
pH
最小的粒径
37℃
0时
**小时
单个最大杂质
单个次要杂质
总杂质
主成分含量
杂质个数
单个最大杂质
次要杂质
总杂质
主成分含量
杂质个数
1
2
pka-1
pka
pka+1
6
6.8
7.5
当出现主成分在某pH值介质中极不稳定、溶解后即迅速分解，无法测定的情况，则该介质溶解度可不测定，其溶出曲线亦可免做。
1.3原研产品溶出曲线考察
针对仿制药，实验者肯定会查询到相关参考文献，控油粉饼如各国药典、国家药监局质量标准、进口质量标准、《日本橙皮书》、美国FDA 公布的溶出曲线数据库、日本仿制药技术申报资料概要(采用"医薬品インタビュ一フォ一ム"和"该药物日文名"在Google上收章即可，内容仅为日文)等，但由于这些标准本身所具有的局限性、历史性和利益性，因此绝不建议实验者不经对原研品的测定验证就直接采用相应的方法，即便是国外药典或进口质量标准，也不应盲目迷信，这也是国家药品审评中心自2008年起就反复强调的"仿产品不是仿标准"宗旨之一。
对于国内已上市产品仿制药，均可购买到进口品或原研厂在国内企业产品。对于国内未上市的药品，研发者必须想办法获得原研品，可通过私人购买带入国内，或通过"世界药房"网站、"白求恩药房"网站等中介机构，或在国外进行试验，绝不应以购买不来为借口，需要自行地进行处方开发与制剂工艺研究和剖析，购买以上原研品时皆应尽可能获取不同时间段的多个批号样品(如出厂不久的和临近效期)将购买来的原研品作为0个月计，研发时，须先采用至少3个批号的样品，进行至少四个介质溶出曲线考察（pH1.2、标准介质、pH4.5、pH6.8、水）作为充分了解并作为处方设计目标。当原研标准介质中加入SDS或其他溶剂时，须对比进行原研产品其他三个介质加入SDS或其他溶剂，以及标准介质不加SDS或其他溶剂的数据。
在进行第一次预试时，推荐至少120分钟进行取样，以初步了解原研溶出信息，在后续的实验中可酌情进行时间点的取舍。
推荐初期试验时进行原研产品至少一个批次的长期及加速6个月稳定性留样，充分了解原研产品信息，在处方工艺达到既定要求后，须与仿制品同时进行6个月的加速试验与长期稳定性对比试验，在0月、3月、6月时间点将样品取出后进行对比测定g7006，从而根据原研品四个介质溶出曲线波动情况对自身仿制品研发和品质做出正确判断与准确评估。
有人肯定会问，黄药师你推荐的方案做多了，之所以要进行6个月的对比试验，是因为，在处方研究过程中，所用的辅料不可能与原研厂家一模一样，这种情况下，0天溶出相似度良好，可不见得贮藏一段时间后还可以相似，所以固体口服制剂研究的工作量及难度要比注射剂研究更大。
原研产品***介质中溶出数据表
取样时间点（min）
原研批号1
原研批号2
原研批号3
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
5
10
15
20
30
45
60
90
120
f2
加速*个月，原研产品（批号**）***介质中溶出数据表
取样时间点（min）
0天
加速3个月
加速6个月
长期3个月
长期6个月
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
溶出（%）
RSD（%）
5
10
15
20
30
45
60
90
120
f2

2.溶出度方法建立
2.1溶出介质及体积的选择
仿制药参考药品标准为依据确定溶出介质，在无标准参考的情况下，属自拟新建方法的需进行至少四个介质进行对比分析研究，一般溶出介质的确定遵循以下几个原则。
2.1.1根据药物在体内吸收的主要消化道部位的生理pH值；
2.1.2一定程度上反应体内外相关性的pH值；
2.1.3最能体现不同厂家来源制剂间彼此差异的pH值；
2.1.4最能反应生产工艺变化、偏差的pH值；
2.1.5溶出数据精密度较佳的pH值；
2.1.6表面活性剂能不加就不加，如果必须加需要有数据支持及用量摸索；
2.1.7胃蛋白酶或胰蛋白酶的加入：当硬胶囊剂使用明胶胶囊壳时，为避免产生交联现象影响溶出时，则可加入，但须进行对比研究有数据支持；当某种药必须饭后服用，且生物等效性试验需在“进食”状态下进行时，则在仿制药研发中必须进行溶出介质中分别添加或不加胃蛋白酶或胰蛋白酶的对比研究，只有数据支持，标准中方可定入。
2.2溶出介质确定
定入标准的溶出介质注意须满足漏槽条件，并满足该介质中最终溶出量达85%以上。用于溶出曲线相似度对比的介质不必都要求满足漏槽条件，因为受试制剂和参比制剂在15分钟内的溶出量≧85%时，可以认为两者溶出行为相似，无需进行f2的比较。
操作方法参见溶解度实验法，如果溶解度实验中已经有达到漏槽条件的要求时，可不必重复进行漏槽条件，若溶解度实验均未达到漏槽条件，需要根据溶解度实验结果确定适当pH介质，采取加入SDS方式使其达到漏槽条件，在没有质量标准等文献支持时，SDS加入量需要进行考察。张瑶萱
漏槽条件判定标准：取溶出介质100ml，加入API原料药，使其过饱和，参见溶解度实验项下的方法进行操作，取上清液，滤过，测定原料药的浓度，按含量测定方法测定浓度A，如制剂规格换算为B浓度，则漏槽为A / B>3。
2.3溶出方法及转速选择
需进行两个转速对比，有标准参考时，其中一个是标准中规定的，另外降低转速进行对比。如果没有标准参考，即可按照指导原则转速选择原则进行。
转速选择的原则，在质量研究的基础上，尽量选择低转速，转篮法推荐100转/分，最低不得低于50转/分。桨法推荐50转/分，最高不超过75转/分。小杯法推荐35转/分，最高不超过50转/分。特殊情况特殊对待。
3．方法学验证内容
3.1专属性试验
专属性试验的目的是考察辅料、包衣材料或胶囊壳对溶出度测定是否存在干扰。
测定方法一般与含量测定方法一致，不必考虑有关物质，只要辅料及杂质不干扰主峰测定即可，尽量的缩短分析时间，前期在进行制剂处方筛选时，一定要把辅料干扰性做的较为全面此时方可无忧，若干扰较大，会存在处方重做的风险。
对照品溶液：取对照品，按拟定标准方法配制。
供试品溶液：参见标准取胶囊或片剂1粒或其他制剂1个单剂量包装或5-10片研细取1个剂量的细粉，置量瓶中，加质量标准中规定的溶出所用溶剂适量，振摇或超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度深海巨鲨 ，摇匀，滤过，取续滤液进样。
空白制剂溶液：取各辅料照制备工艺项下的方法制备空白制剂。取空白制剂置量瓶中，加质量标准中规定的溶出所用溶剂适量，超声使充分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液进样。
辅料溶液：分别取各辅料适量（约单个制剂中的用量），各置量瓶中，加拟定的溶出所用溶剂适量，超声使充分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀相声坛子 ，滤过，取续滤液进样。
判断标准：空白溶液及辅料空白对照，以液相色谱法为例，在主成分的位置不出峰桑植天气预报，供试品溶液色谱峰的理论板数、拖尾因子要符合要求。
辅料对溶出度测定的干扰小于2%可忽略不计，如果超过2%低于5%可以进行校正（尽量通过重新优化处方辅料或优化改变测定分析方法解决，别引入校正，事太多，因为每批次的辅料有别，校正系数理论上是根本无法相同固定值），大于5%的需重新优化处方辅料或优化改变测定分析方法。
3.2滤膜吸附试验
供试品溶液：参见标准取胶囊或片剂1粒或其他制剂1个单剂量包装或5-10片研细取1个剂量的细粉，置量瓶中，加质量标准中规定的溶出所用溶剂适量，振摇或超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，分为2份，一份进行滤过，另一份进行离心，取上清液进样。过滤液分别弃去不同的体积，分别取续滤液进样，比较峰面积的变化，结果见下表。
样品
峰面积
吸附量%
离心上清液
弃3ml
弃5ml
弃7ml
判断标准：吸附量应不大于离心液方法的2%，超过2%时可通过更换滤膜孔径或更换滤膜材质进行试验解决。
3.3检出限及定量限
一般溶出度的测定方法是与含量测定方法相同的，因此溶出度的检测限及定量限可以不做，在含量测定的方法学中进行测定即可。
如果方法不同，就需要进行测定。
3.4线性与范围
取对照品适量，按标准方法配制系列浓度的溶液，通常不少于7份，例如5%、25%、50%、75%、100%（标准规定的限度浓度）、120%、150%。
最低浓度样品的色谱图中，信噪比要不低于10:1。以峰面积对浓度进行线性回归，线性相关系数r（保留4位有效数字）不小于0.999或R2不小于0.998。
浓度级
5%
25%
50%
75%
100%
120%
150%
浓度ug/ml
峰面积
回归方程
相关系数r
3.5精密度
取本品，照标准中拟定的溶出度测定法，依法操作，在溶出度测定规定的取样时间点，取溶液50-100ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液，连续进样6次。RSD小于2%。
样品编号
峰面积
峰面积均值
RSD
1
2
3
4
5
6
3.6溶液稳定性
取精密度项下供试品溶液，分别在0h、4h、8h、12h、16h、24h进行分析检测，峰面积RSD小于2%。可以与精密度实验在同一天进行，某个时间点接近的图谱可以共用。
样品编号
峰面积
峰面积均值
RSD
0h
4
8
12
16
24
3.7重复性
第一批放大制剂样品，取本品6片，照标准中拟定的溶出度测定法，依法操作，在溶出度测定规定的时间点，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。溶出量RSD小于2%。
必须进样空白溶剂、空白制剂、对照品溶液。对照品溶液可以双样单针。
样品编号
峰面积
溶出量%
溶出量均值
RSD
对照品-1
对照品-2
1
2
3
4
5
6
3.8中间精密度
与重复性隔天、更换溶出仪及分析设备、更换人员，取本品6片，照标准中拟定的溶出度测定法，依法操作，在溶出度测定规定的时间点，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。将重复性的6个样品数据共同统计分析，溶出量RSD小于2%。
必须进样空白溶剂、空白制剂、对照品溶液。对照品溶液可以双样单针。
样品编号
峰面积
溶出量%
溶出量均值
RSD
对照品-1
对照品-2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
3.9回收率
回收率一般规定为限度的±20%，一般的制剂都规定溶出度限度为标示量的80%，因此选择回收率范围为标示量的60%、80%、100%。
必须进样空白溶剂、空白制剂、对照品溶液。对照品溶液可以双样单针。
分别按照标示量10倍量的60%、80%、100%比例称取原料药适量各一份，分别加入10片量的空白辅料，与原料药混匀，在3个比例样品内各称取样品三份（相当于标示量的60%、80%、100%），置于溶出仪中，按照规定的时间进行取样分析多蒙卡修。
回收率范围
原料药投入量
辅料投入量
回收率样品编号
回收率样品称样量
60%
1
2
3
80%
4
5
6
100%
7
8
9
样品编号
峰面积
溶出量mg
投入量mg
回收率
%
回收率均值
%
回收率RSD
对照品-1
对照品-2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
判断标准：回收率范围98%-102%，RSD小于2%。
进行回收率实验时，分析人员一定要与制剂人员多沟通，投料顺序、是否研磨混匀操作都有可能对回收率有影响，因此回收率试验时，推荐采用制剂工艺相同的投料顺序，避免发生回收率低，头脑发懵，不知所然臻璇，呵呵，这可是经过的教训。
3.10耐用性
如果与含量测定方法的条件一致，耐用性可以不做。
3.11溶出曲线对比
四个介质，三批产品与原研产品进行对比，必须采用12片进行对比。
时间根据不同的样品进行设置，时间点的设置参照指导原则进行。
完成溶出曲线对比，也就完成了3批样品的溶出度检查，取其中前6个制剂的数据即可作为报告单的溶出度测定结果。
**介质批内溶出曲线数据批号：****
样品编号
不同时间点溶出度
5min
10min
15min
30min
45min
60min
90min
120min
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
溶出度均值
RSD
判定标准：1、批内重复性好；
2、批间重复性好；
3、四个介质与原研溶出相似度良好。
4、但是笔者认为对溶出度或可根据具体品种具体分析对待，如果因溶出度高，导致与原研相似度不合格，也未必不可以，需关注产品所属适应症，安全性及吸收代谢分布数据酌定。

感谢转载，转载请注明，原作者：黄药师 及微信号：welovediscovery
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